address2arrow-email-sendarrow-rightbtn-right-arrowbubbleclosecomment-arrow-answerenvelopeeyefriendshamburgerheartHeart copy 26heart-emptyhomehumanlikelk-bubblelk-eyeHeart copy 26lk-pencilloginnav-editnav-eyenav-newsnav-starnav-userloginnext-arrow-rightpagination-lastpagination-nextShape 19 copysearchstarstar-fulluserBriefcaseCard
9 Июля, 2018

Новая метка для более точной локализации белков внутри клеток

Разработан способ внутриклеточной локализации белков, который заключается в использовании метки на основе ферритина для корреляционной световой и электронной микроскопии.

Принцип работы FerriTag. N. I. Clarke, S. J. Royle. // Nature Communications, 2018, DOI: 10.1038/s41467-018-04993-0. Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Принцип работы FerriTag. N. I. Clarke, S. J. Royle. // Nature Communications, 2018, DOI: 10.1038/s41467-018-04993-0. Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Подготовила Екатерина Харыбина

Группа исследователей из Уорикского университета (Великобритания) придумали метку, подходящую для обнаружения белка как с помощью световой, так и с помощью электронной микроскопии.

Световая микроскопия позволяет детектировать движение белка в клетке, но ее разрешения недостаточно для точного определения его местоположения — для этого применяется электронная микроскопия. Сейчас для локализации белков в геном клетки вводятся генетически кодируемые метки, например, GFP — так удается избежать повреждений клетки при включении метки извне.

Недавно для корреляционной световой и электронной микроскопии предложили использовать белки, взаимодействующие с металлами. Последние хорошо рассеивают электроны, которые после фокусировки дают лучшее разрешение. Однако ранее использованные белки имели свои недостатки.

Исследователи сделали генетически кодируемую метку на основе ферритина — белка, участвующего в запасании железа в клетках (в ходе эксперимента клетки культивировались в среде, богатой железом). Ферритин связали с флуоресцирующим белком mCherry (красный) и доменом FRB, связывающим рапамицин в комплексе с FKBP. Метку назвали FerriTag и с ее помощью попробовали локализовать HIP1R — белок оболочки клатриновых впячиваний и везикул. Этот белок в свою очередь связали с GFP (зеленый) и FKBP (см. рисунок).

В ходе эксперимента после добавления рапамицина FerriTag связалась с HIP1R (за счет системы FRB-рапамицин-FKBP). В световом флуоресцентном микроскопе можно было наблюдать, как красные точки (FerriTag) подходили к зеленым шарикам (клатриновые везикулы). Это позволило определить локализацию HIP1R с помощью электронной микроскопии. Метка FerriTag дала хорошее разрешение и высокое соотношение сигнал/шум.

«Самое классное в FerriTag — то, что она генетически закодирована. Это значит, что мы получаем клетки, которые сами производят метку: нам не нужно вводить ее извне, что могло бы повредить клеткам», — отметил руководитель исследования Стивен Ройл.

Источник

Nicholas I. Clarke, Stephen J. Royle. // FerriTag is a new genetically-encoded inducible tag for correlative light-electron microscopy.//Nature Communications, 2018, DOI: 10.1038/s41467-018-04993-0

Пресс-релиз: New method discovered to view proteins inside human cells

44
0
Лидеры мнений
Лидеры отрасли
  • FUTURE
    13
САМЫЕ ОБСУЖДАЕМЫЕ ТЕМЫ ФОРУМА
Поиск материалов по тегам